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擔(dān)負(fù)分離作用的液相色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟
點(diǎn)擊次數(shù)：2327 更新時(shí)間：2021-06-01
色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對液相色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。
市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等，其粒度一般為3，5，7，10um等，柱效理論值可達(dá)5～16萬/米。
對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對于同系物分析，只要500即可;對于較難的分離物質(zhì)對則可采用高達(dá)2萬的柱子，因此一般10～30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到最佳效率，除柱外死體積要小外，也要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。
即使*裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。
這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍料徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
1、柱的構(gòu)造
液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成，壓力不高于70Kg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。
為提高柱效，減小管壁效應(yīng)，不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度，其效果與拋光相同還有使用熔融硅或玻璃襯里的，用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板，是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金，孔徑0.2-20um(5-10um),取決于填料粒度，目的是防止填料漏出，柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定，目的是為了避免管壁效應(yīng)。
2、柱的填充
液相色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外，還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下，填料粒度>20um時(shí)，干法填充制備柱較為合適;顆粒<20um時(shí)，濕法填充較為理想。填充方法一般有四種：
①高壓勻漿法，多有用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充;
②徑向加壓法;
③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱;
④干法，柱填充的技術(shù)性強(qiáng)，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用己填充好的商品柱。
必須指出，高效液相色譜柱的獲得，裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié)，但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣，以及配套的色譜儀系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)是否合理。
